C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/00 (2006.01) C07K 2/00 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) A61K 38/17 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01)
Patent
CA 2516550
The present invention relates to eukaryotic host cells, especially lower eukaryotic host cells, having modified oligosaccharides which may be modified further by heterologous expression of a set of glycosyltransferases, sugar and sugar nucleotide transporters to become host-strains for the production of mammalian, e.g., human therapeutic glycoproteins. The process provides an engineered host cell which can be used to express and target any desirable gene(s) involved in glycosylation. Host cells with modified lipid-linked oligosaccharides are created or selected. N-glycans made in the engineered host cells exhibit GnTIII, GnTIV, GnTV, GnT VI or GnTIX activity, which produce bisected and/or multiantennary N-glycan structures and may be modified further by heterologous expression of one or more enzymes, e.g., glycosyltransferases, sugar, sugar nucleotide transporters, to yield human- like glycoproteins. For the production of therapeutic proteins, this method may be adapted to engineer cell lines in which any desired glycosylation structure may be obtained.
La présente invention concerne des cellules hôtes eucaryotes, plus particulièrement des cellules hôtes eucaryotes inférieures, qui possèdent des oligosaccharides modifiés qui peuvent être encore modifiés par l'expression hétérologue d'un ensemble de glycosyltransférases, de sucre et de transporteurs de nucléotide de sucre, de façon à devenir des souches hôtes pour la production de mammifères, en particulier des glycoprotéines thérapeutiques humaines. Ce processus fournit une cellule hôte modifiée qui peut être utilisée pour exprimer et cibler n'importe quel(s) gène(s) recherché(s) impliqué dans la glycosylation. On crée ou on sélectionne des cellules hôtes avec des oligosaccharides liées par des lipides modifiés. Des N-glycanes fabriqués dans des cellules hôtes modifiées présentent une activité GnTIII, GnTIV, GnTV, GnT VI ou GnTIX, qui produisent des structures N-glycane recoupées et/ou multiantennulaires et qui peuvent être modifiés à nouveau par l'expression hétérologue d'une ou de plusieurs enzymes, par exemple des glycosyltransférases, du sucre, des transporteurs de sucre, de façon à produire des glycoprotéine de type humain. Pour la production de protéines thérapeutiques, cette technique peut être adaptée de façon à modifier des lignées cellulaires dans lesquelles on peut obtenir n'importe quelle structure de glycosylation.
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Hamilton Stephen R.
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Glycofi Inc.
LandOfFree
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