Assays for inhibitors of ftsh

Details Assays for inhibitors of ftsh Assays for inhibitors of ftsh

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 1/20 (2006.01) A01N 63/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)

Patent

CA 2364384

This invention provides a bacterial system and assay for detecting and quantifying activity of bacterial growth regulator, FtsH. The bacteria include three expression cassettes. An FtsH expression cassette comprises a first promoter operatively linked to a nucleotide sequence encoding FtsH. A transcriptional regulator expression cassette comprises a second promoter operatively linked to a nucleotide sequence encoding a transcriptional regulator which regulates the activity of a third promoter, wherein the transcriptional regulator is a substrate of FtsH. A reporter expression cassette comprises the third promoter operatively linked to a reporter gene. The activity of FtsH can be read out as a positive expression of the reporter gene. The invention also provides an assay for compounds that modulate the expression of FtsH. The assay involves contacting the recombinant bacterial cell with the agent, and determining whether the agent modulates the expression of the reporter gene.

L'invention porte sur un système bactérien et un essai permettant de détecter et de quantifier l'activité du régulateur FtsH de la croissance bactérienne. La bactérie comprend trois cassettes d'expression, à savoir: une cassette d'expression du FtsH comportant un premier promoteur fonctionnellement lié à une séquence nucléotidique codant pour le FtsH; une cassette d'expression du régulateur de transcription comportant un deuxième promoteur fonctionnellement lié à une séquence nucléotidique codant pour un régulateur de transcription qui régule l'activité d'un troisième promoteur, ledit régulateur de transcription constituant le substrat du FtsH; une cassette d'expression du rapporteur comportant un troisième promoteur fonctionnellement lié à un gène rapporteur. L'activité du FtsH s'exprime par une expression positive du gène rapporteur. L'invention porte également sur un essai modulant l'expression du FtsH consistant à mettre en contact les cellules bactériennes de recombinaison avec l'agent, puis à déterminer si l'agent module ou non l'expression du gène rapporteur.

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