C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/02 (2006.01) C07K 14/01 (2006.01) C07K 14/65 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01) C12N 1/06 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01) C12N 9/36 (2006.01)
Patent
CA 2346797
Processes are described for recovering heterologous polypeptide from bacterial cells, including the periplasm and cytoplasm. One process involves culturing the bacterial cells, which cells comprise nucleic acid encoding phage lysozyme and nucleic acid encoding a protein that displays DNA-digesting activity, wherein these nucleic acids are linked to a first promoter, and nucleic acid encoding the heterologous polypeptide, which nucleic acid is linked to a second promoter, under certain conditions to produce a broth lysate; and recovering accumulated heterologous polypeptide from the broth lysate. Another process entails culturing bacterial cells that comprise nucleic acid encoding phage lysozyme, gene t, and nucleic acid encoding a protein that displays DNA-digesting activity under the control of a signal sequence for secretion of said DNA-digesting protein, wherein said nucleic acids are linked to one or more promoters, and nucleic acid encoding the heterologous polypeptide, which nucleic acid encoding the heterologous polypeptide is linked to another promoter that is inducible, under certain conditions to produce a broth lysate; and recovering accumulated heterologous polypeptide from the broth lysate.
L'invention concerne des procédés de récupération de polypeptide hétérologue à partir de cellules bactériennes, notamment le périplasme et le cytoplasme. Un procédé consiste d'abord à faire une culture de cellules bactériennes, lesquelles comprennent un acide nucléique codant pour un lysozyme phage et un acide nucléique codant pour une protéine affichant une activité de digestion d'ADN, -ces acides nucléiques étant liés à un premier promoteur-, ainsi qu'un acide nucléique codant pour le polypeptide hétérologue, lequel acide nucléique est lié à un second promoteur, dans certaines conditions, afin de produire un lysat de milieu de culture, puis à récupérer, à partir de ce lysat, le polypeptide hétérologue accumulé. Un autre procédé consiste à faire une culture de cellules bactériennes comprenant un acide nucléique codant pour un gène t à activité de lysozyme phage, un acide nucléique codant pour une protéine affichant une activité de digestion d'ADN sous la commande d'une séquence de signaux destinée à la sécrétion de ladite protéine de digestion d'ADN, ces acides nucléiques étant liés à au moins un promoteur, ainsi qu'un acide nucléique codant pour le polypeptide hétérologue et une séquence de signaux destinée à la sécrétion du polypeptide hétérologue, lequel acide nucléique codant ce polypeptide hétérologue est lié à un autre promoteur qui peut être induit, dans certaines conditions, à produire un lysat de milieu de culture; puis à récupérer, à partir de ce lysat, le polypeptide hétérologue accumulé.
Leung Woon-Lam Susan
Swartz James R.
Genentech Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1734436