C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01)
Patent
CA 2233701
A method for determining the activity of a nucleotide polymerizing enzyme in a sample, and use of the method for determining HIV 1 RT- and Herpes Simplex DNA- polymerase activity. The enzyme is captured by means of a monoclonal antibody which is immobilized to a solid carrier and is capable of binding the enzyme without detrimentally effecting the enzyme activity. Contaminants and disturbing factors are removed and the nucleotide polymerization starts by the addition of a reaction solution containing a primer/template construct and nucleotides substrate, the reaction conditions being chosen such that they promote permanent association between antibody enzyme- and primer/template constructs. When necessary nucleotide substrate, primer/template and reaction solution are washed away from the newly synthesized polymer, and the amount of nucleotide which has been incorporated into the polymer is determined, and the activity of the enzyme is determined with the guidance of this determination.
Procédé servant à déterminer l'activité d'une enzyme de polymérisation de nucléotide dans un spécimen et mise en application de ce procédé afin de déterminer l'activité d'ADN polymérase de HIV 1 RT et Herpes Simplex. On capture cette enzyme au moyen d'un anticorps monoclonal immobilisé sur un support solide et capable de fixer l'enzyme sans exercer d'effet négatif sur son activité. On retire les contaminants et les facteurs de perturbation et la polymérisation du nucléotide commence par l'apport d'une solution de réaction contenant un produit de recombinaison composé d'une amorce et d'un gabarit, ainsi qu'un substrat de nucléotide, les conditions de la réaction étant sélectionnées de façon à promouvoir l'association permanente entre les produits de recombinaison anticorps-enzyme et amorce-gabarit. Si nécessaire, on effectue le lavage du substrat de nucléotide, du produit de recombinaison amorce-gabarit et de la solution réactionnelle, afin de les éloigner du polymère venant d'être synthétisé et on détermine la quantité de nucléotide qui a été incorporée dans le polymère, ce qui permet de déterminer l'activité de l'enzyme.
Gronowitz Jan-Simon
Kallander Clas
Lennerstrand Johan
Borden Ladner Gervais Llp
Cavidi Tech Ab
Gronowitz Jan-Simon
Kallander Clas
LandOfFree
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