Multiplexed strand displacement for nucleic acid determinations

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2379749

Multiplexed determinations of large numbers of events are achieved in an accurate and simple manner by using a combination of different oligonucleotides, which serve for both capture and release from a support and strand displacement oligonucleotides for sequential release of groups of oligonucleotides. Also included, as part of the oligonucleotide reagents may be identifiers, which serve to identify a particular characteristic. The method is illustrated using primers for initiation of chain extension joined to or serving as the capture/release sequence, where the extended primer has an identifier. After extending the primer, the extended primers are captured and independently released and the released extended primers assayed. The subject method finds application for nucleic acid sequence determinations, single nucleotide polymorphism determinations, identification of nucleic acid fragments, and the like.

Des déterminations multiplexées de grands nombres d'événements sont obtenues d'une manière précise et simple à l'aide d'une combinaison de différents oligonucléotides, lesquels servent à la fois à la capture et à la libération sur et à partir d'un support, et des oligonucléotides de déplacement de brins destinés à la libération séquentielle de groupes d'oligonucléotides. Sont également compris, faisant partie des réactifs oligonucléotidiques, des identificateurs, lesquels servent à identifier une caractéristique particulière. La méthode est illustrée à l'aide d'amorces pour l'amorçage de prolongement de chaîne joints à ou servant de séquence de capture/libération, l'amorce prolongée ayant un identificateur. Après prolongement de l'amorce, les amorces prolongées sont capturées et libérées indépendamment et les amorces prolongées libérées sont dosées. La méthode de l'invention trouve une application dans des déterminations de séquences d'acide nucléique, des déterminations de polymorphismes mononucléotidiques, l'identification de fragments d'acide nucléique et analogue.

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