C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/67 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)
Patent
CA 2422190
Compositions and methods for stably integrating a nucleotide sequence of interest into the genome of an organism are provided. The compositions are novel integration vectors comprising an active cleaved donor complex, or CDC, which comprises a Mu transposable cassette of a mini-Mu plasmid or precleaved mini-Mu plasmid. The Mu transposable cassette comprises the nucleotide sequence of interest and is bound to MuA transposase to form the CDC. In the presence of MuB-bound host DNA, the MuA protein bound as part of the MuA tetrameric core facilitates transfer of the Mu transposable cassette, which comprises the nucleotide sequence of interest, into the host DNA at the site to which MuB is bound. The inser5ted Mu transposable cassette remains stably integrated at this site within the host genome. MEthods of the invention inlcude transforming a host organism with such an integration vector and with a plasmid comprising the MuB coding sequence operably linked to a promoter that dries expression in the host organism. Transient expression of the MuB accessory proein results in random binding of this protein to the genome of the organism. MuB-bound genomic DNA becomes the site for insertion of the integration vectors of the invention and stable integration of the nucleotide sequence of interest within the organism's genome. Transformed plant cells, tissues, plants, and seed are also povided.
L'invention concerne des compositions et des procédés permettant une intégration stable d'une séquence de nucléotide présentant un intérêt dans le génome d'un organisme. Les compositions sont de nouveaux vecteurs d'intégration comportant un complexe de donneur clivé actif, ou CDC, qui contient une cassette transposable Mu d'un plasmide mini-Mu ou un plasmide mini-Mu préclivé. La cassette transposable Mu comprend la séquence de nucléotide présentant un intérêt et est également liée à la transposase MuA, en vue de former le CDC. En présence d'ADN hôte lié au MuB, la protéine MuA liée comme partie du noyau tétramérique MuA facilite le transfert de la cassette transposable Mu, qui comprend la séquence de nucléotide présentant un intérêt, dans l'ADN hôte sur le site auquel le MuB est lié. La cassette transposable Mu insérée reste intégrée de manière stable à ce site, à l'intérieur du génome hôte. L'invention concerne également des procédés de transformation d'un organisme hôte au moyen d'un tel vecteur d'intégration et par un plasmide contenant la séquence codant le MuB associé de manière fonctionnelle à un promoteur qui arrête l'expression dans l'organisme hôte. L'expression transitoire de la protéine secondaire MuB a pour conséquence la liaison aléatoire de cette protéine au génome de l'organisme. L'ADN génomique lié au MuB devient le site d'insertion des vecteurs d'intégration décrits par la présente invention et de l'intégration stable de la séquence de nucléotide présentant un intérêt à l'intérieur du génome de l'organisme. L'invention concerne également des cellules, des tissus, des plants et des semences de plante transformée.
Pioneer Hi-Bred International Inc.
Torys Llp
LandOfFree
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