C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2284253
A method for in vitro construction of a library of recombined homologous polynucleotides from a number of different starting DNA templates and primers by induced template shifts during a polynucleotide synthesis is described, whereby: A. extended primers are synthesized by a) denaturing the DNA templates, b) annealing primers to the templates, c) extending the said primers by use of a polymerase, d) stop the synthesis, and e) separate the extended primers from the templates; B. a template shift is induced by a) isolating the extended primers from the templates and repeating steps A.b) to A.e) using the extended primers as both primers and templates, or b) repeating steps A.b) to A.e), C. this process is terminated after an appropriate number of cycles of process steps A. and B.a), A. and B.b), or combinations thereof. Optionally the polynucleotides are amplified in a a standard PCR reaction with specific primers to selectively amplify homologous polynucleotides of interest.
L'invention a trait à une méthode vitro de constitution d'une bibliothèque de polynucléotides homologues à partir d'un certain nombre de matrices d'ADN et d'amorces de départ par réarrangement provoqué des fragments de matrice après trois cassures durant une synthèse polynucléotidique. Dans le cadre de cette méthode, (A), les sondes allongées sont synthétisées de la manière suivante: (a), dénaturation des matrices d'ADN, (b), hybridation des amorces aux matrices, (c), allongement desdites amorces par utilisation d'une polymérase, (d), arrêt de la synthèse et (e), séparation des amorces allongées des matrices; (B), le réarrangement des fragments de matrice après trois cassures est provoqué par (a), une isolation des amorces allongées des matrices et (b), la répétition des étapes allant de Ab à Ae en utilisant les amorces allongées à la fois comme amorces et matrices ou la répétition des étapes allant de Ab à Ae. Il est mis fin au processus après l'exécution d'un nombre pertinent de cycles d'étapes A et Ba, A et Bb ou de leur combinaison. Les polynucléotides peuvent, éventuellement, être amplifiés dans une amplification en chaîne par polymérase (ACP) classique avec des amorces spécifiques afin d'amplifier de manière sélective des polynucléotides homologues d'intérêt.
Dimock Stratton Llp
Novo Nordisk A/s
Novozymes A/s
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1847023