Method to screen high affinity antibody

Details Method to screen high affinity antibody Method to screen high affinity antibody

G - Physics

01

N

G01N 21/55 (2006.01)

Patent

CA 2732872

The current invention reports a method for producing an antibody comprising the steps of a) providing a plurality of hybridoma cells each expressing an antibody, b) determining the time dependent amount of said antibody bound to the respective antigen by surface plasmon resonance at different temperatures and different antibody concentrations, c) calculating with the time dependent amount determined in b) based on equations (II) to (XIII) at least the thermodynamic parameters (i) standard association binding entropy formula (A), (ii) standard dissociation binding entropy formula (B), (iii) standard binding entropy (.DELTA.S°), (iv) free standard binding enthalpy (.DELTA.G°), (v) standard dissociation free binding enthalpy formula (C), (vi) standard association free binding enthalpy formula (D), (vii) -T.DELTA.S°, (viii) dissociation rate constant k d, (ix) equilibrium binding constant K D, and (x) association rate constant k a, d) selecting a hybridoma cell producing an antibody with at least two of the following: i) a standard association binding entropy of less than 10 J/K*mol, ii) an absolute standard dissociation binding entropy of 100 J/mol*K or more, iii) an absolute standard binding entropy of 100 J/mol*K or more, e) producing an antibody by cultivating said selected cell under conditions suitable for the expression of said antibody and recovering said antibody from the

La présente invention concerne un procédé de production d'un anticorps, comprenant les étapes consistant a) à utiliser une pluralité de cellules d'hybridomes exprimant chacune un anticorps, b) à déterminer la quantité, variant en fonction du temps, desdits anticorps liés à leur antigène respectif par détection par résonance plasmonique de surface à différentes températures et pour différentes concentrations en anticorps, c) à calculer, à partir de la quantité, variant en fonction du temps, déterminée au point b) et sur la base des équations (II) à (XIII), au moins les paramètres thermodynamiques suivants : (i) formule (A) de l'entropie standard de liaison par association, (ii) formule (B) de l'entropie standard de liaison par dissociation, (iii) l'entropie standard de liaison (?S°), (iv) l'enthalpie standard de liaison libre (?G°), (v) la formule (C) de l'enthalpie standard de liaison libre par dissociation, (vi) la formule (D) de l'enthalpie standard de liaison libre par association, (vii) -T?S°, (viii) la constante de dissociation kd, (ix) la constante de liaison à l'équilibre KD et (x) la constante d'association ka, d) à sélectionner une cellule d'hybridome produisant un anticorps dans le respect d'au moins deux des principes suivants : (i) une entropie standard de liaison par association inférieure à 10 J/K*mol, ii) une entropie standard absolue de liaison par dissociation supérieure ou égale à 100 J/mol*K, iii) une entropie standard absolue de liaison supérieure ou égale à 100 J/mol*K, e) à produire un anticorps en cultivant ladite cellule sélectionnée dans des conditions permettant l'expression dudit anticorps, cela étant suivi du recueil dudit anticorps à partir desdites cellules et/ou du milieu de culture.

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