C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C40B 50/06 (2006.01)
Patent
CA 2270414
Disclose is a method for making full-length cDNA libraries, which is for making libraries of cDNAs having lengths corresponding to full lengths of mRNAs and comprises the following steps of; forming RNA-DNA hybrids by reverse transcription starting from primers using mRNAs as templates, chemically binding a tag molecule to a diol structure present in the 51 Cap (7me G PPP N ) site of a mRNA which is forming a RNA-DNA hybrid, and separating RNA-DNA hybrids carrying a DNA corresponding to a full-length mRNA from the RNA-DNA hybrids formed above by using a function of the tag molecule. The present method is a method for preparing full-length cDNA libraries utilizing a method for labeling the 5' Cap site more efficiently than protein enzyme reactions, which is avoidable a decrease of a full-length cDNA synthesis efficiency caused by cleavage of mRNA, and can synthesize a full-length cDNA more efficiently.
Cette invention concerne un procédé de fabrication d'une banque d'ADNc qui correspond à l'ARNm dans toute sa longueur. Ce procédé consiste à former des complexes ARN-ADN en effectuant la transcription inverse de primères qui utilisent l'ARNm comme modèle. Une molécule jouant le rôle d'étiquette est ensuite liée chimiquement à la structure diol située dans le site 5'Cap (<7Me>GpppN) de l'ARNm constituant les complexes ARN-ADN. Le complexe ARN-ADN, qui possède un ADN correspondant à un ARNm dans toute sa longueur, est ensuite séparé des complexes ARN-ADN auxquels est liée la molécule étiquette en tirant avantage de la fonction de cette dernière. Ce procédé permet ainsi de former une banque d'ADNc dans toute sa longueur en étiquetant efficacement le site 5'Cap par une réaction protéine/enzyme. Il est ainsi possible d'éliminer tout manque d'efficacité dû à un clivage de l'ARNm lors de la synthèse d'ADNc dans toute sa longueur, et de synthétiser ce dernier avec une grande efficacité.
Dennison Associates
The Institute Of Physical And Chemical Research
LandOfFree
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