C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/74 (2006.01)
Patent
CA 2352203
The present invention provides novel assay methods for identifying compounds that selectively activate estrogen receptors (ER) of the alpha or beta subtype. In particular, the results from two assays, one measuring ER-.beta. activity and the other measuring ER-.alpha. activity are interpreted. The assay measuring ER-.beta. activity uses cells comprising endogenous metallothionein-II as well as a DNA plasmid comprising a polynucleotide encoding human ER-.beta.. The assay monitors expression of metallothionein-II- mRNA in said cells, wherein the level of metallothionein-II expression is regulated when a potential ligand binds to ER-.beta.. The assay measuring ER- .alpha. activity uses cells comprising ER-.alpha. as well as DNA plasmid comprising a reporter gene linked to an estrogen response element. The assay monitors expression of the reporter gene, wherein the level of reporter gene is regulated when a potential ligand binds to ER-.alpha.. Compounds which modulate activity in one assay but have little or no activity in the other assay are defined as estrogen receptor subtype selective.
La présente invention concerne de nouvelles méthodes de dosage permettant d'identifier des composés qui activent sélectivement des récepteurs des oestrogènes du sous-type alpha ou bêta. L'invention concerne notamment l'interprétation des résultats de deux dosages, l'un mesurant l'activité des récepteurs des oestrogènes .beta. et l'autre mesurant l'activité des récepteurs des oestrogènes .alpha.. Le dosage de mesure de l'activité des récepteurs des oestrogènes .beta. fait intervenir des cellules comprenant une métallothionéine II endogène ainsi qu'un plasmide d'ADN comprenant un polynucléotide codant pour des récepteurs des oestrogène .beta. humains. Le dosage permet de contrôler l'expression de métallothionéine II-ARNm dans ces cellules, le niveau d'expression de la métallothionéine II étant régulé lorsqu'un ligand potentiel se lie aux récepteurs des oestrogènes .beta.. Le dosage de mesure de l'activité des récepteurs des oestrogènes .alpha. fait intervenir des cellules comprenant les récepteurs des oestrogènes .alpha. ainsi qu'un plasmide d'ADN comprenant un gène rapporteur lié à un élément de réponse des oestrogènes. Le dosage permet de contrôler l'expression du gène rapporteur, le niveau du gène rapporteur étant régulé lorsqu'un ligand potentiel se lie aux récepteurs des oestrogènes .alpha.. Des composés modulant une activité dans un dosage mais ne possédant pas d'activité ou possédant peu d'activité dans l'autre dosage sont définis comme sélectifs d'un sous-type de récepteurs des oestrogènes.
Bhat Ramesh A.
Harris Heather
American Home Products Corporation
Smart & Biggar
Wyeth
LandOfFree
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