A - Human Necessities – 61 – K
Patent
A - Human Necessities
61
K
A61K 38/00 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C07K 1/14 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C07K 17/00 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2492324
The invention provides a method for isolating and identifying proteins participating in protein-protein interactions in a complex mixture. The method uses a chemically reactive supporting matrix to isolate proteins that in turn non-covalently bind other proteins. The supporting matrix is isolated, and the non-covalently bound proteins are subsequently released for analysis. Because the proteins are accessible to chemical manipulation at both the binding and release steps, identification of the non-covalently bound proteins yields information on specific classes of interacting proteins, such as calcium- dependent or substrate-dependent protein interactions. This permits selection of a subpopulation of proteins from a complex mixture on the basis of specified interaction criteria. The method has the advantage of screening the entire proteome simultaneously, unlike two-hybrid systems or phage display methods which can only detect proteins binding to a single bait protein at a time. The method is applicable to the study of protein-protein interactions in biopsy and autopsy specimens, to the study of protein-protein interactions in the presence of signalling molecules, pharmacological agents or toxins, and for comparison of diseased and normal tissues or cancerous and untransformed cells.
La présente invention concerne un procédé d'isolement et d'identification de protéines qui interviennent dans les interactions protéine-protéine dans un mélange complexe. Le procédé utilise une matrice de support chimiquement réactive afin d'isoler les protéines qui se lient tour à tour de manière non covalente à d'autres protéines. La matrice de support est isolée et les protéines liées de manière non covalente sont libérées ultérieurement en vue de leur analyse. Du fait que les protéines sont accessibles pour une manipulation chimique à la fois à l'étape de liaison et à l'étape de libération, l'identification des protéines liées de manière non covalente fournit l'information relative aux classes spécifiques de protéines d'interaction, à savoir l'interaction de protéines dépendant du calcium ou dépendant d'un substrat. Ceci permet de sélectionner une sous-population de protéines à partir d'un mélange complexe en fonction de critères d'intersection spécifiés. Le procédé présente l'avantage de cribler le protéome entier simultanément, à la différence des systèmes à deux hybrides ou des procédés d'affichage de bactériophages ne pouvant détecter que les protéines se liant à une seule protéine servant d'appât à la fois. Le procédé trouve une application dans l'étude des interactions protéine-protéine dans les spécimens de biopsie et d'autopsie, dans l'étude des interactions protéine-protéine en présence de molécules de signalisation, d'agents pharmacologiques ou de toxines, et dans la comparaison de tissus malades et normaux ou de cellules cancéreuses et non transformées.
Alkon Daniel L.
Nelson Thomas J.
Blanchette Rockefeller Neuroscience Institute
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1934230