C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/28 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) C12N 5/078 (2010.01)
Patent
CA 2264698
A medium and method for culturing lymphocytes are provided for determining intracellular concentration of glutathione or cysteine in human lymphocytes to provide biochemical analysis of an individual's capability of dealing with oxidative stress. The medium is a buffered serum-free solution having a pH of from about 6.8 to 7.6 and containing a carbohydrate which is glucose or a compound capable of producing glucose in lymphocytes, pantothenic acid, choline or a substance capable of producing choline in lymphocytes, inorganic ions including chloride, phosphate, calcium, magnesium, potassium, sodium and iron, L-Buthionine-[S.R.]-Sulfoximine, deionized water and a mitogen to stimulate lymphocytes. When determining cysteine concentration, the medium additionally contains N-Acetyl-L Cysteine and Cumene Hydroperoxide. The method is carried out by inoculating the culture medium with lymphocytes from an individual, incubating the lymphocytes in the medium and comparing the response of the lymphocytes with an average response of lymphocytes from a control group of individuals.
L'invention concerne un milieu et un procédé permettant la culture de lymphocytes afin de déterminer la concentration intracellulaire de glutathion ou de cystéine dans les lymphocytes humains pour effectuer une analyse biochimique de la capacité d'un individu de supporter un stress oxydatif. Le milieu est constitué d'une solution sans sérum dotée d'un tampon présentant un pH compris entre 6,8 et 7,6 et contenant un hydrate de carbone consistant en glucose ou en un composé susceptible de produire du glucose dans les lymphocytes, de l'acide pantothénique, de la choline ou une substance susceptible de produire de la choline dans les lymphocytes, des ions inorganiques comprenant du chlorure, du phosphate, du calcium, du magnésium, du potassium, du sodium, et du fer, L-buthionine-[S.R.]-sulfomixine, de l'eau désionisée et un mitogène pour stimuler les lymphocytes. Lorsqu'on détermine la concentration de cystéine, le milieu contient en outre de la cystéine N-acétyl-L et de l'hydroperoxyde de cumène. Le procédé consiste à inoculer dans le milieu de culture des lymphocytes provenant d'un individu, à incuber les lymphocytes dans le milieu et à comparer la réponse des lymphocytes avec une réponse moyenne de lymphocytes provenant d'un groupe témoin d'individus.
Borden Ladner Gervais Llp
Research Development Foundation
LandOfFree
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