Paired end sequencing

Details Paired end sequencing Paired end sequencing

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)

Patent

CA 2712426

An embodiment of a method for obtaining a DNA construct comprising two end regions of a target nucleic acid in an in vitro reaction is described that comprises the steps of: fragmenting a large nucleic acid molecule to produce a target nucleic acid molecule; ligating a recombination adaptor element to each end of the target nucleic acid molecule to produce an adapted target nucleic acid molecule; exposing the adapted target nucleic acid to a site specific recombinase to produce a circular nucleic acid product and a linear nucleic acid product from the adapted target nucleic acid, wherein the circular nucleic acid product comprises the target nucleic acid molecule; and fragmenting the circular nucleic acid product to produce a template nucleic acid molecule comprising a sequence region from each end of the target nucleic acid molecule.

L'invention porte sur un mode de réalisation d'un procédé pour obtenir un produit de construction d'ADN comprenant deux régions d'extrémité d'un acide nucléique cible dans une réaction in vitro. Ce procédé consiste à : fragmenter une molécule d'acide nucléique de grande dimension pour produire une molécule d'acide nucléique cible; ligaturer un élément adaptateur de recombinaison à chaque extrémité de la molécule d'acide nucléique cible pour produire une molécule d'acide nucléique cible adaptée; exposer l'acide nucléique cible adapté à une recombinase dirigée pour produire un produit d'acide nucléique circulaire et un produit d'acide nucléique linéaire à partir de l'acide nucléique cible adapté, le produit d'acide nucléique circulaire comprenant la molécule d'acide nucléique cible; et fragmenter le produit d'acide nucléique circulaire pour produire une molécule d'acide nucléique matrice comprenant une région de séquence provenant de chaque extrémité de la molécule d'acide nucléique cible.

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