C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2501983
The present invention is directed to a novel method of efficiently synthesizing, in a non-specific manner, multiple copies of a target RNA. The present invention also relates to kits relating to the same and the use of these copies for determining gene expression pattern. In particular, the present invention relates to a method for generating multiple RNA copies comprising the steps of (a) providing a sample comprising target RNA; wherein said sample is simultaneously contacted with an oligonucleotide comprising at its 5' side a promoter sequence recognized by an RNA polymerase, wherein each oligonucleotide further comprises a target hybridising sequence, which is a random sequence or a predetermined sequence and possibly a modification at its 3' terminal end in such a way that extension therefrom is prohibited; and, an enzyme having DNA polymerase activity; an enzyme having RNase H activity; an enzyme having RNA polymerase activity; and, sufficient amounts of dNTPs and rNTPs; and, (b) maintaining the resulting reaction mixture under the appropriate conditions for a sufficient amount of time for the enzymatic processes to take place.
La présente invention se rapporte à un nouveau procédé permettant de synthétiser de manière efficace et non spécifique de multiples copies d'un ARN cible. L'invention a également trait à des kits associés, ainsi qu'à l'utilisation desdites copies pour déterminer des motifs d'expression génétique. En particulier, l'invention concerne un procédé permettant de générer de multiples copies d'ARN, qui comprend les étapes consistant : (a) à fournir un échantillon contenant un ARN cible, ledit échantillon étant mis simultanément en contact : avec un oligonucléotide possédant sur son côté 5' une séquence de type promoteur reconnue par une polymérase ARN, chaque oligonucléotide comprenant également une séquence d'hybridation cible, laquelle est une séquence aléatoire ou une séquence prédéterminée, et présentant éventuellement une modification au niveau de son extrémité terminale 3', si bien que toute extension à partir de cette dernière est prohibée ; avec une enzyme présentant une activité ADN polymérase ; avec une enzyme présentant une activité Rnase H ; avec une enzyme présentant une activité ARN polymérase ; et avec des quantités suffisantes de dNTP et de rNTP ; et (b) à maintenir le mélange réactionnel dans les conditions appropriées et pendant une durée suffisante pour que les processus enzymatiques puissent avoir lieu.
Borden Ladner Gervais Llp
Pamgene B.v.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1974453