Method of enhancing enzyme activity

Details Method of enhancing enzyme activity Method of enhancing enzyme activity

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 9/42 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C40B 30/00 (2006.01)

Patent

CA 2719211

Described are methods and means for enhancing enzyme activity toward insoluble substrates. This is achieved by means of in vitro compartmentalization in which an insoluble microparticle functions both as the enzyme substrate and as a structure for negative selection. Enhanced enzymes expressed from a microparticle-linked polynucleotide library preferentially degrade the microparticle releasing specific gene variants into solution. Gene variants encoding less active enzyme variants remain linked to the microparticle and may be removed through centrifugation, thus enriching the polynucleotide library for more active enzyme variants. These methods may be used to enhance cellulase and ligninase activity toward insoluble cellulosic biomass.

Linvention concerne des procédés et des moyens damélioration de lactivité enzymatique envers des substrats insolubles. Ceci est réalisé par une compartimentation in vitro selon laquelle une microparticule insoluble fonctionne à la fois en tant que substrat enzymatique et en tant que structure pour la sélection négative. Les enzymes améliorées exprimées à partir dune bibliothèque de polynucléotides reliés à des microparticules dégradent préférentiellement la microparticule en libérant des variantes géniques spécifiques dans la solution. Les variantes géniques qui codent pour des variantes enzymatiques moins actives restent liées à la microparticule et peuvent être éliminées par centrifugation, enrichissant ainsi la bibliothèque de polynucléotides avec davantage de variantes enzymatiques actives. Ces procédés peuvent être utilisés pour améliorer lactivité de la cellulase et de la ligninase envers la biomasse cellulosique insoluble.

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