C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/55 (2006.01) C12N 9/16 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2291452
Methods of altering substrate specificity of plant acyl-ACP thioesterases, and engineered plant acyl-ACP thioesterases so produced are provided. The C- terminal two thirds portion of plant thioesterases is identified as desirable for such modifications. DNA sequences and constructs for expression of engineered thioesterases, as well as the novel thioesterases produced therefrom are also provided. Such DNA sequences may be used for expression of the engineered thioesterases in host cells, particularly seed cells of oilseed crop plants, for the modification of fatty acid composition. A C12 preferring plant acyl-ACP thioesterase described herein may be altered to obtain a plant thioesterase having approximately equal activity on C14 and C12 substrates. Further modification of the C12 enzyme yields a thioesterase having greater activity on C14 as compared to C12 substrates. Of particular interest is a plant 18:1 thioesterase in which the relative 18:0 activity has been increased. Such FatA thioesterases find use for improved production of stearate in vegetable seed oils.
L'invention concerne des procédés permettant de modifier la spécificité de substrat d'acyl-ACP thioestérases végétales, et des acyl-ACP thioestérases végétales mises au point génétiquement qui sont produites à l'aide des procédés. La partie représentant les deux tiers de l'extrémité C des thioestérases végétales est identifiée comme étant souhaitable pour ces modifications. L'invention concerne également des séquences et des produits de recombinaison d'ADN utiles en vue de l'expression de thioestérases mises au point génétiquement, ainsi que les nouvelles thioestérases végétales produites à partir de ceux-ci. Ces séquences d'ADN peuvent être utilisées en vue de l'expression des thioestérases mises au point génétiquement dans des cellules hôtes, en particulier dans des cellules de semences de plantes cultivées oléagineuses, afin de modifier la composition d'acides gras. Une acyl-ACP thioestérase végétale présentant une préférence pour C12, décrite dans la demande, peut être modifiée de façon à obtenir une thioestérase végétale présentant une activité approximativement égale à l'égard de substrats de C14 et de substrats de C12. Un modification supplémentaire de l'enzyme de C12 permet d'obtenir une thioestérase présentant une activité supérieure sur des substrats de C14 par rapport à des substrats de C12. Une thioestérase 18:1 végétale présentant un intérêt particulier est celle dont l'activité relative 18:1 a été accrue. De telles thioestérases FatA sont utiles en vue d'une production accrue de stéarate dans des huiles de graines végétales.
Calgene Llc
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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