Flow-through shear analyzer for biologically active...

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 21/55 (2006.01) G01N 13/00 (2006.01) G01N 21/03 (2006.01) G01N 21/43 (2006.01) G01N 1/34 (2006.01)

Patent

CA 2333391

The adsorption speed of proteins from solutions on surfaces in the area of boundary layers is frequently so high that a depletion of the proteins results in the boundary layer. As a result, the entire reaction is transfer-dependent thus substantially disrupting the determination of the speed constants. Up to know, it has not been possible to remove these limitations with regard to transfer in preart total internal reflection fluorescence (TIRF) analysis chambers or biosensor systems having a liquid boundary layer of 10 µm thick and mass transfer coefficients of 10-6-10-5 m/s. An ultra thin liquid layer results on the surface having a thickness of 100-200 nm, whereby boundary layers having a thickness of less than 100 nm are also technically possible, with the aid of a TIRF flow-through shear analyzer in which a determined unit of volume of a fluid which cannot be mixed, for example an air bubble, is fed to the buffer current. The novel TIRF flow-through shear analyzer thus permits the generation of ultra thin liquid layers while increasing the mass transfer coefficients for proteins by 50 to 100 times such that the sorption speed constants can be determined without limitations with regard to transfer.

La vitesse d'adsorption de protéines, provenant de solutions, sur des surfaces, dans la zone de couches limites, est fréquemment d'une importance telle qu'elle entraîne un appauvrissement de la protéine dans la couche limite. Ainsi, la réaction globale devient dépendante du transport, ce qui perturbe sensiblement la détermination des constantes de vitesse. Jusqu'ici, il n'était pas possible, dans les chambres d'analyse à fluorescence par réflexion interne totale ou dans des systèmes de biocapteurs présentant une couche limite de liquide d'une épaisseur de ?10 µm et des coefficients de transport massique de 10?-6¿-10?-5¿ m/s, de supprimer cette limitation de transport. A l'aide d'un analyseur de cisaillement de flux passant à fluorescence par réflexion totale interne, dans lequel une unité de volume définie d'un fluide non miscible, par exemple une bulle d'air, est amenée au courant tampon, on obtient une couche de liquide ultramince sur la surface, d'une épaisseur de 100-200 nm, l'obtention de couches limites d'une épaisseur inférieure à 100 nm étant aussi techniquement possible. Le nouvel analyseur de cisaillement de flux passant à fluorescence par réflexion interne totale permet ainsi la production de couches de liquide ultraminces avec élévation des coefficients de transport massique pour les protéines de 50 à 100 fois, de telle sorte que les constantes de vitesse de sorption peuvent être déterminées sans limitation de transport.

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