C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2455607
A method for constructing multiple nucleic acid sequences for use as positive controls in a genetic test is described. Compositions according to the invention including multiple nucleic acid sequences constructed as described are the optimal controls for simultaneously testing multiple variable nucleic acid sequences at one or more DNA or RNA sites in a subject or subjects. Sequences according to the invention can be prepared chemically and/or by PCR amplification for use directly or after cloning and propagation. At the same time, some sequences can be PCR amplified and/or cloned directly from total genomic DNA obtained from an individual carrying the mutation or variant. Alternatively, the normal sequence to be changed can be cloned and then modified by site directed mutagenesis. Several single mutant or polymorphic sequences that together comprise a panel of multiple control sequences can be added individually to single site tests or mixed together or ligated together by further PCR or by cloning into vectors prior to use in individual or multiplex tests. Controls sequences constructed according to the invention can be used when testing any genetically transmitted nucleic acid sequence by organizations testing quality assurance and by companies maintaining quality control of manufactured genetic test kits.
La présente invention concerne un procédé de construction de multiples séquences d'acide nucléique destinées à être utilisées comme témoins positifs dans une analyse génétique. Les compositions selon l'invention comprenant de multiples séquences d'acide nucléique construites tel que décrit représentent les témoins optimaux permettant d'analyser simultanément de multiples séquences variables d'acide nucléique au niveau d'au moins un site ADN ou ARN chez un ou des sujets. Les séquences selon l'invention peuvent être préparées chimiquement et/ou par amplification par PCR pour être utilisées directement ou après clonage et propagation. Dans le même temps, certaines séquences peuvent être amplifiées par PCR et/ou clonées directement à partir d'ADN génomique total obtenu à partir d'un individu porteur de la mutation ou du variant. Dans une variante, la séquence normale à changer peut être clonée puis modifiée par mutagenèse dirigée. Plusieurs séquences mutantes ou polymorphes uniques comprenant chacune un échantillon de multiples séquences témoins peuvent être ajoutées individuellement à des analyses de sites uniques voire mélangées ou liées par PCR supplémentaire ou par clonage dans des vecteurs préalablement à leur utilisation dans des analyses individuelles ou multiplex. Les séquences témoins construites selon l'invention peuvent être utilisées lors de l'analyse de n'importe quelle séquence d'acide nucléique transmise génétiquement par des organisations analysant l'assurance de qualité et par des sociétés de maintien de contrôle qualité de matériels d'analyse génétique manufacturés.
Lebo Roger V.
Milunsky Aubrey
Wang Zhenywan
Yamin Moshe
Children's Hospital Medical Center Of Akron
Ridout & Maybee Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2060432