C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01)
Patent
CA 2236711
A method for the simultaneous detection of polygenes involving the following steps (a) to (f): (a) the step of converting an mRNA into a cDNA by using primers for reverse transcription having the following characteristics (1) to (3): (1) having in the 3'-terminal side of the oligo dT an anchoring part represented by 5'-M(N)q-3' (wherein M represents a base selected from among A, G and C; N represents a base selected from among A, G, C and T; and q is 0 or 1); (2) having in the 5'-terminal side of the oligo dT a site for forming a solid phase; and (3) having an enzyme cleavage site between the 5'-terminus of the oligo dT and the site for forming a solid phase; (b) the step of cleaving the cDNA with a restriction enzyme; (c) the step of labeling the restriction enzyme cleavage site of the cDNA; (d) the step of forming a solid phase of the labeled cDNA fragment and recovering the same; (e) the step of cleaving the enzyme cleavage site in the 5'-terminus of the reverse transcription primer with an enzyme to thereby give a solubilized and labeled cDNA fragment; and (f) the step of subjecting the labeled cDNA fragment to two-dimensional gel electrophoresis.
L'invention porte sur un procédé de détection simultanée de polygènes comportant les étapes (a) à (f) suivantes: (a) conversion d'un ARNm en ADNc à l'aide d'amorces de transcription inverse selon le processus suivant: (1) présenter dans l'extrémité 3' terminale de l'oligo-désoxythymidine une partie d'ancrage de formule 5'-M(N)¿q?-3' (dans laquelle M représente une base sélectionnée parmi A, G et C; N représente une base sélectionnée parmi A, G, C et T, et q est 0 ou 1, (2) présenter dans l'extrémité 5' terminale de l'oligo-désoxythymidine un site de formation d'une phase solide, (3) présenter un site de coupure enzymatique entre le terminus 5'- de l'oligo-désoxythymidine et le site de formation d'une phase solide; (b) coupure de l'ADNc par une enzyme de restriction; (c) marquage du site de coupure de l'ADNc par l'enzyme de restriction; (d) formation d'une phase solide avec le fragment d'ADNc suivie de sa récupération; (e) coupure du site de coupure de l'enzyme au terminus (5) de l'amorce de transcription inverse par une enzyme pour obtenir un fragment d'ADNc solubilisé et marqué; et (f) soumission du fragment d'ADNc marqué à une électrophorèse bidimensionnelle sur gel.
Suzuki Harukazu
Watanabe Sachihiko
Yaoi Takeshi
Mccarthy Tetrault Llp
Shionogi & Co. Ltd.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2062093