Nucleic acid amplification

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P

Patent

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C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2463933

Disclosed are compositions and a method for amplification of nucleic acid sequences of interest. The disclosed method generally involves replication of a target sequence such that, during replication, the replicated strands are displaced from the target sequence by strand displacement replication of another replicated strand. In one form of the disclosed method, the target sample is not subjected to denaturing conditions. It was discovered that the target nucleic acids, genomic DNA, for example, need not be denatured for efficient multiple displacement amplification. The primers used can be hexamer primers. The primers can also each contain at least one modified nucleotide such that the primers are nuclease resistant. The primers can also each contain at least one modified nucleotide such that the melting temperature of the primer is altered relative to a primer of the same sequence without the modified nucleotide(s). The DNA polymerase can be ~29 DNA polymerase.

L'invention se rapporte à des compositions et à un procédé d'amplification de séquences d'acides nucléiques d'intérêt. Ledit procédé consiste généralement à répliquer une séquence cible de manière que, lors de la réplication, les brins répliqués soient déplacés de leur séquence cible par réplication du déplacement de brin d'un autre brin répliqué. Dans un aspect dudit procédé, l'échantillon cible n'est pas soumis à des conditions de dénaturation. On a découvert que les acides nucléiques cibles, l'ADN génomique, par exemple, n'avaient pas besoin d'être dénaturés pour de meilleures amplifications de déplacement. Les amorces utilisées peuvent être des amorces hexamères ; elles peuvent également contenir chacune au moins un nucléotide modifié afin que les amorces résistent aux nucléases. Lesdites amorces peuvent aussi contenir chacune au moins un nucléotide modifié afin que la température de fusion de l'amorce soit modifiée par rapport à une amorce de la même séquence sans le(s) nucléotide(s) modifié(s). L'ADN polymérase peut être l'ADN polymérase .phi.29.

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