C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2291440
In a first aspect, the method of the invention includes the steps of annealing a primer to a target nucleic acid; performing a first primer extension reaction using a first primer extension reagent; separating the target-primer hybrid and unreacted first primer extension reagent; performing a second primer extension reaction using a second primer extension reagent, wherein at least one of the first or second primer extension reagents includes an extendible nucleotide having a label attached thereto; separating the target-primer hybrid from unreacted second primer extension reagent; measuring a signal produced by the label; treating the label so as to render the label undetectable; and repeating the above steps untils the signal is substantially less than a signal detected in a previous cycle. In a second aspect, the method of the invention includes the steps of annealing a primer to a target nucleic acid; performing a first primer extension reaction using a first primer-extension reagent; separating the target-primer hybrid from unreacted first primer extension reagent; performing a second primer extension reaction using a second primer extension reagent and with a primer termination reagent, the primer termination reagent including a nucleotide terminator having a label attached thereto; separating the target- primer hybrid from unreacted second primer extension reagent and unreacted primer termination reagent; measuring a signal produced by the label; and repeating the above steps until a signal is detected indicating incorporation of the nucleotide terminator. The invention further includes kits useful for practicing the above methods.
Cette invention se rapporte à un procédé qui, selon une première réalisation, consiste à hybrider une amorce à un acide nucléique cible; à effectuer une première réaction d'extension d'amorce au moyen d'un premier réactif d'extension d'amorce; à séparer l'hybride d'amorce cible et le premier réactif d'extension d'amorce n'ayant pas réagi; à effectuer une seconde réaction d'extension d'amorce au moyen d'un second réactif d'extension d'amorce; l'un au moins des premier et second réactifs d'extension d'amorce comportant un nucléotide extensible sur lequel est fixé un marqueur; à séparer l'hybride d'amorce cible du second réactif d'extension d'amorce n'ayant pas réagi; à mesurer un signal produit par le marqueur; à traiter le marqueur de manière à le rendre indécelable; et à répéter les étapes ci-dessus jusqu'à ce que le signal soit sensiblement moins intense qu'un signal détecté au cours d'un cycle antérieur. Dans une seconde réalisation de l'invention, ledit procédé consiste à hybrider une amorce à un acide nucléique cible; à effectuer une première réaction d'extension d'amorce au moyen d'un premier réactif d'extension d'amorce; à séparer l'hybride d'amorce cible du premier réactif d'extension d'amorce n'ayant pas réagi; à effectuer une seconde réaction d'extension d'amorce au moyen d'un second réactif d'extension d'amorce et d'un réactif de terminaison d'amorce, ledit réactif de terminaison d'amorce comportant un agent de terminaison de nucléotide sur lequel est fixé un marqueur; à séparer l'hybride d'amorce cible du second réactif d'extension d'amorce n'ayant pas réagi et du réactif de terminaison d'amorce n'ayant pas réagi; à mesurer un signal produit par le marqueur; et à répéter les étapes ci-dessus jusqu'à détection d'un signal indiquant l'incorporation de l'agent de terminaison de nucléotide. Cette invention se rapporte en outre à des trousses utiles à la mise en oeuvre des procédés décrits ci-dessus.
Blasband Andrew J.
Livak Kenneth J.
Lowe Adam L.
Applied Biosystems Llc
Perkin-Elmer Corporation The
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2085351