C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/06 (2006.01)
Patent
CA 2269116
The present invention relates to a novel cell line ("HL-1") derived from a transplantable mouse cardiomyocyte lineage (AT-1) wherein the cell line has the following characteristics: a) can be serially passaged greater than two hundred times and retain the ability to spontaneously contract; b) can be frozen, stored in, and recovered from liquid nitrogen, and revived upon thawing; c) can be cultured in serum-free medium; d) retains ultrastructural characteristics of in vitro adult atrial cardiac muscle cells; e) displays a pattern of gene expression similar to that of adult atrial myocytes including ANF, atrial natriuretic factor, .alpha.-cardiac myosin heavy chain, .alpha.- cardiac actin and connexin43; f) responds positively to immunohistochemical stains for desmin, sarcomeric myosin, and atrial natriuretic peptide; g) will give rise to tumors when injected subcutaneously into syngeneic mice; h) can secrete into the culture medium growth factors including basic fibroblast growth factor (bFGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), platelet derived growth factor (PDGF), epithelial growth factor (EGF), transforming growth factor beta 1(TGF-.beta.1), and adrenomedullin; i) displays a cardiac- like, rapidly activating and inactivating delayed rectifier potassium current with biophysical and pharmacological characteristics that are nearly identical to those described for cardiac IKr; j) displays time- and voltage-dependent inward currents that are most likely sodium and L-type calcium currents. The present invention further relates to a cell culture system which can be used as an in vitro model of the cardiac muscle cell to screen and test cardiac drugs.
La présente invention porte sur une nouvelle lignée cellulaire ("HL-1") provenant d'un lignage (AT-1) transplantable de cellules d'Anitschkov de la souris. Cette lignée cellulaire présente les caractéristiques suivantes: a) elle peut être entretenue par plus de deux cents fois passages successifs et a la capacité de se contracter spontanément; b) elle peut être congelée, stockée dans l'azote liquide et récupérée, et réactivée lors de sa décongélation; c) elle peut être mise en culture dans un milieu sans sérum; d) elle conserve des caractéristiques ultrastructurelles des cellules du muscle cardiaque auriculaire in vitro chez l'adulte; e) elle présente une configuration d'expression génique similaire à celle des myocytes auriculaires chez l'adulte tels que l'ANF, facteur natriurétique auriculaire, une chaîne lourde de la myosine cardiaque alpha , une actine cardiaque et une connexine43; f) elle répond positivement aux souches immunohistochimiques pour la desmine, la myosine sarcomérique et le peptide natriurétique auriculaire; g) elle donne naissance à des tumeurs lorsqu'elle est injectée par voie sous-cutanée dans des souris syngéniques; h) elle peut sécréter dans un milieu de culture des facteurs de croissance tels que le facteur de croissance fibroblaste basique, le facteur de croissance des cellules endothéliales vasculaires, le facteur de croissance dérivé des plaquettes sanguines, le facteur de croissance des cellules épithéliales, le facteur de croissance transformant bêta 1 et l'adrénomédulline; i) elle présente un courant de potassium redresseur retardé, à inactivation et activation rapides de type cardiaque, dont les caractéristiques biophysiques et pharmacologiques sont presque identiques à celles décrites pour le canal cardiaque IKr; j) elle présente des courants internes dépendants du temps et de la tension et pratiquement identiques aux courants de sodium et de calcium de type L. La présente invention porte également sur un système de culture de cellules pouvant être utilisé comme modèle in vitro de la cellule du muscle cardiaque pour cribler et tester les médicaments pour le coeur.
Claycomb William Creighton
Kirby Eades Gale Baker
The Procter & Gamble Company
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1424966