C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/81 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01) C12P 7/06 (2006.01)
Patent
CA 2253581
Described are recombinant yeast which ferment xylose to ethanol and which maintain their ability to do so when cultured for numerous generations in non- selective media. The preferred yeast contain multiple copies of integrated genes encoding xylose reductase, xylitol dehydrogenase, and xylulokinase fused to promoters which are non-glucose inhibited and which do not require xylose for induction. Also described are preferred methods for integrating multiple copies of exogenous DNA into host cells by transforming cells with replicative/integrative vectors, and then replicating the cells a number of times under selective pressure to promote retention of the vector in subsequent generations. The replicated vectors thus serve to integrate multiple copies of the exogenous DNA into the host cells throughout the replication/selection phase. Thereafter the selective pressure can be removed to promote loss of the vector in subsequent generations, leaving stable integrants of the exogenous DNA.
On décrit des levures recombinantes capables de transformer le xylose en éthanol par fermentation et qui conservent cette capacité lorsqu'elles sont mises en croissance sur de nombreuses générations dans un milieu non sélectif. La levure préférée contient des copies multiples de gènes intégrés codant la xylose réductase, la xylitol déshydrogénase et la xylulokinase et fusionnés sur des promoteurs non inhibés par le glucose et qui ne nécessitent pas de xylose pour l'induction. On décrit également les procédés préférés d'intégration des copies multiples d'un ADN exogène dans des cellules hôtes par transformation des cellules possédant des vecteurs de réplication/d'intégration et par réplication répétitive des cellules sous une pression sélective; ces opérations favorisant la rétention du vecteur dans les générations suivantes. Les vecteurs répliqués servent ainsi à intégrer les copies multiples de l'ADN exogène dans les cellules hôtes à travers toute la phase de réplication/de sélection. Passé ce stade, la pression sélective peut être relâchée afin de favoriser la perte du vecteur dans les générations suivantes, alors que des constituants intégrés stables restent dans l'ADN exogène.
Chen Zheng-Dao
Ho Nancy W.y.
Purdue Research Foundation
Smart & Biggar
LandOfFree
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