C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01)
Patent
CA 2692984
Particular aspects provide efficient allelic exchange methods to generate directed mutations within genes of slow-growing stains of mycobacteria (e.g., Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map), Map10 or GFP-expressing Map K-10) using a phage-delivery system, and demonstrate high efficiency allelic exchange. Additional exemplary aspects provide non-naturally occurring slow-growing strains of mycobacteria (e.g., Map, M.bovis, M. tuberculosis) having at least one gene deletion (e.g., pknG, relA, lsr2, panC, panD, proC, trpD, sapM (MAP3432), lysA_1, leuD, and leuC, and deletion mutants at the orthologous loci of two known virulence genes in pathogenic mycobacteria (relA and pknG) and one gene related to colony morphology and biofilm formation in fast growing mycobacteria (lsr2) were made. Further aspects provide novel vaccines comprising such deletion mutants, or portions thereof, and methods for making said vaccines. Yet further aspects provide methods for protecting a mammal from virulent Map, M. bovis, or M. tuberculosis, comprising treating the mammal with the inventive vaccines.
Des aspects spécifiques de l'invention concernent des procédés d'échange d'allèles efficaces pour générer des mutations dirigées à l'intérieur de gènes de souches à croissance lente de mycobactéries (e.g., Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map), Map10 ou Map K-10 exprimant la GFP) au moyen d'un système de distribution de phages, et pour démontrer un échange d'allèles hautement efficace. D'autres aspects de l'invention concernent des souches à croissance lente de mycobactéries se produisant de façon non naturelle (e.g., Map, M. bovis, M. tuberculosis) présentant au moins une délétion de gène (e.g., pknG, relA, lsr2, panC, panD, proC, trpD, sapM (MAP3432), lysA_1, leuD, et leuC, et des mutants de délétion sur les loci orthologues de deux gènes de virulence connus dans les mycobactéries pathogènes (relA et pknG) et un gène associé à la morphologie de colonie et la formation de biofilm dans les mycobactéries à croissance rapide (lsr2) ont été élaborés. D'autres aspects concernent de nouveaux vaccins comprenant lesdits mutants de délétion, ou des parties de ceux-ci, et des procédés pour la préparation desdits vaccins. D'autres aspects concernent des procédés pour protéger un mammifère contre les mycobactéries virulentes Map, M. bovis, ouM. tuberculosis, qui consistent à traiter le mammifère avec les vaccins mentionnés précédemment.
Dahl John
Davis William C.
Hamilton Mary Jo
Park Kun Taek
Smart & Biggar
Washington State University
LandOfFree
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