C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/63 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12N 5/02 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01)
Patent
CA 2355349
The present invention provides vectors and methods which improve the efficiency of nucleic acid insertion into circular vectors, which generally facilitate nucleic acid cloning and specifically facilitate the preparation of DNA libraries. In general, the present invention involves separation of the cloning process into two distinct steps: (a) insertion which is done at a high nucleic acid concentration favoring intermolecular joining, and (b) circularization which is performed at a low nucleic acid concentration favoring intramolecular circularization. The present vectors generally have distinct insertion ends and circularization ends which are blocked from covalent joining during the insertion step. Circularization ends contemplated by the present invention include complementary cohesive ends and topoisomerase- linked ends. The present vectors and methods allow minute amounts of nucleic acid inserts to be efficiently cloned. Moreover, little or no insert size selection occurs with the present methods so that large as well assmall nucleic acid inserts are readily inserted into the present vectors. Thus, DNA libraries which are representative of the entire range of size of DNA inserts can be made, and, for example, full length cDNA libraires are readily obtained.
L'invention concerne des vecteurs et des procédés qui permettent d'améliorer l'efficacité de l'insertion d'acides nucléiques dans des vecteurs circulaires, qui facilitent de manière générale le clonage d'acides nucléiques et notamment la constitution de bibliothèques d'ADN. D'une façon générale, la présente invention consiste à séparer le processus de clonage en deux stades: a) l'insertion, effectuée avec une concentration élevée d'acides nucléiques qui favorise la liaison intermoléculaire; b) et la circularisation, effectuée avec une faible concentration d'acides nucléiques qui favorise la circularisation intramoléculaire. Les présents vecteurs possèdent de manière générale des extrémités distinctes d'insertion et de circularisation dont on empêche la liaison par covalence au stade d'insertion. Les extrémités de circularisation décrits dans l'invention comprennent des extrémités complémentaires cohésives et des extrémités liées par topo-isomérase. Les présents vecteurs et procédés permet de cloner efficacement des quantités infimes d'inserts d'acides nucléiques. En outre, ces procédés n'entraînent pas ou peu de sélection en fonction de la taille des inserts, ce qui permet d'insérer aisément dans ces vecteurs des inserts d'acides nucléiques de faible taille ou de taille importante. De cette manière, on peut constituer des bibliothèques d'ADN représentatives de la totalité d'une gamme de tailles d'inserts d'ADN et, par exemple, obtenir facilement des bibliothèques d'ADNc de longueur complète.
Borden Ladner Gervais Llp
Romantchikov Yuri
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2080244