C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) B01D 15/08 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G01N 30/02 (2006.01) G01N 30/88 (2006.01)
Patent
CA 2396667
A method for removing a target DNA fragment having a predetermined base-pair length from a mixture of DNA fragments comprises the following steps. A mixture of DNA fragments which may contain the target DNA fragments is applied to a separation column containing media having a nonpolar, nonporous surface, the mixture of DNA fragments being in a first solvent mixture containing a counterion and a DNA binding concentration of driving solvent in a cosolvent. The target DNA fragments are separated from the media by contacting it with a second solvent solution containing a counterion and a concentration of driving solvent in cosolvent which has been predetermined to remove DNA fragments having the target DNA fragment base pair length from the media. The target DNA fragments can be collected and optionally amplified. When the method is being applied to collect a putative fragment, if present, no DNA fragments having the base pair length of the target DNA could be present in the mixture. Alternatively, DNA fragments having the base pair length of the target DNA are present in the mixture. The disclosure also describes an ambient or low pressure device for separating polynucleotide fragments from a mixture of polynucleotide fragments which comprises a tube having an upper solution input chamber, a lower eluant receiving chamber, and a fixed unit of separation media supported therein. The separation media has nonpolar separation surfaces which are free from multivalent cations which would react with couterion to form an insoluble polar coating on the surface of the separation media.
La présente invention concerne un procédé permettant d'éliminer un fragment d'ADN cible ayant une longueur de paires de bases prédéterminée, à partir d'un mélange de fragments d'ADN, ledit procédé comprenant les étapes suivantes: un mélange contenant des fragments d'ADN, qui peut contenir les fragments d'ADN cible, est appliqué à une colonne de séparation contenant un milieu ayant une surface non poreuse, non polaire, le mélange de fragments d'ADN se trouvant dans un premier mélange de solvants contenant un ion antagoniste et une concentration de liaison d'ADN d'un solvant d'entraînement dans un cosolvant; les fragments d'ADN cible sont séparés du milieu grâce à leur mise en contact avec une deuxième solution de solvants contenant un ion antagoniste et une concentration de solvant d'entraînement dans un cosolvant qui a été préparé pour permettre d'éliminer du milieu les fragments d'ADN ayant la longueur de paires de bases de fragments d'ADN cible. Les fragments d'ADN cible peuvent être recueillis et éventuellement amplifiés. Lorsque le procédé est appliqué pour recueillir un fragment putatif, si celui-ci est présent, aucun fragment d'ADN ayant la longueur de paires de bases de l'ADN cible ne peut être présent dans le mélange. De façon alternative, des fragments d'ADN ayant la longueur de paires de bases de l'ADN cible sont présents dans le mélange. Cette invention concerne également un dispositif à pression ambiante ou à basse pression, servant à séparer des fragments polynucléotidiques d'un mélange de fragments polynucléotidiques, ledit dispositif comprenant un tube présentant un compartiment supérieur d'entrée de solution, un compartiment inférieur de réception d'éluant, et une unité fixe du milieu de séparation qui s'y trouve. Le milieu de séparation présente des surfaces non polaires qui sont dépourvues de cations plurivalents qui réagiraient sinon avec l'ion antagoniste pour former une couche polaire insoluble à la surface du milieu de séparation.
Gjerde Douglas T.
Haefele Robert M.
Hanna Christopher P.
Legendre Benjamin L. Jr.
Taylor Paul D.
Dennison Associates
Gjerde Douglas T.
Haefele Robert M.
Hanna Christopher P.
Legendre Benjamin L. Jr.
LandOfFree
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