C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/34 (2006.01) C12N 9/90 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2263716
The present invention provides a method of covalently joining a DNA strand to an RNA strand comprising (a) forming a topoisomerase-DNA intermediate by incubating a DNA cleavage substrate comprising a topoisomerase cleavage site with a topoisomerase specific for that site, wherein the topoisomerase-DNA intermediate has one or more 5' single-strand tails; and (b) adding to the topoisomerase-DNA intermediate an acceptor RNA strand complementary to the 5' single-strand tail under conditions permitting a ligation of the covalently bound DNA strand of the topoisomerase-DNA intermediate to the RNA acceptor strand and dissociation of the topoisomerase, thereby covalently joining the DNA strand to the RNA strand. The present invention also provides a method of tagging a 5' end of an RNA molecule. The present invention further provides a DNA-RNA molecule which has been joined in vitro by the use of a topoisomerase. The present invention also provides a method of tagging a 5' end of an mRNA. The present invention provides a method of isolating and cloning full-lenght gene sequences using capped mRNA after subtraction of non- capped RNA.
La présente invention concerne un procédé d'assemblage covalent d'un brin d'ADN à un brin d'ARN consistant: (a) à former un intermédiaire d'ADN de topoisomérase en faisant incuber un substrat de clivage d'ADN qui comprend un site de clivage de topoisomérase avec une topoisomérase propre à ce site, l'intermédiaire d'ADN de topoisomérase présente une ou plusieurs extrémités monocaténaires 5'; et (b) à ajouter à l'intermédiaire d'ADN de topoisomérase, un brin d'ARN accepteur complémentaire à l'extrémité monocaténaire 5'. Cet ajout se fait dans des conditions qui permettent de ligaturer le brin d'ADN à liaison covalente de l'intermédiaire d'ADN de topoisomérase, au brin accepteur d'ARN et de dissocier la topoisomérase, assemblant ainsi de manière covalente le brin d'ADN au brin d'ARN. Cette invention concerne également un procédé de marquage de l'extrémité 5' d'une molécule d'ARN. La présente invention concerne, en outre, une molécule d'ADN-ARN assemblée in vitro à l'aide d'une topoisomérase. La présente invention concerne également un procédé de marquage d'une extrémité 5' d'un ARNm. La présente invention concerne, en outre, un procédé d'isolation et de clonage de séquences de gènes dans toute leur longueur à l'aide d'un ARNm à coiffe après soustraction d'un ARN sans coiffe.
Comiskey John
Fernandez Joseph
Hoeffler James
Marcil Robert
Sekiguchi Joann
Invitrogen Corporation
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
Sloan-Kettering Institute For Cancer Research
LandOfFree
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