G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/68 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C12N 9/64 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01)
Patent
CA 2405332
The present invention provides an isolated, functionally-active protein that catalyzes cleavage of a gamma-secretase substrate. The functional activity of the isolated protein suggests that the isolated protein includes gamma- secretase. In one embodiment, the isolated gamma-secretase protein is associated with PS1. The present invention also relates to homogeneous methods for monitoring cleavage of .beta.-amyloid precursor protein (.beta.APP) by gamma-secretase, wherein the steps of isolating and retrieving cleavage products have been eliminated. Cleavage can be detected by binding a pair of fluorescent adducts to the gamma-cleaved .beta.APP fragment. Preferably, a first fluorescent adduct binds to the carboxy-terminal end of the gamma- cleaved .beta.APP fragment, with substantially no cross-reactivity to uncleaved .beta.APP or to other types of gamma-cleaved .beta.APP fragments, while a second fluorescent adduct binds to a portion within the amino-terminal region on the gamma-cleaved .beta.APP fragment. Detection of binding to the gamma-cleaved .beta.APP fragment is determined by monitoring the fluorescent energy transfer between the adducts.
La présente invention concerne une protéine isolée, fonctionnellement active, qui catalyse le clivage d'un substrat de gamma-secrétase. L'activité fonctionnelle de la protéine isolée suggère que ladite protéine renferme une gamma-secrétase. Selon un mode de réalisation, la protéine gamma-secrétase est associée à PS1. Cette invention porte également sur des méthodes homogènes de surveillance du clivage de la protéine précurseur .beta.-amyloïde (.beta.APP) par la gamma-secrétase, qui ont permis d'éliminer les opérations d'isolement de d'extraction des produits de clivage. On peut détecter un clivage en reliant une paire d'adduits fluorescents au fragment de .beta.APP clivé par gamma-secrétase. Il est préférable de relier un premier adduit fluorescent au terminal carboxy du fragment de .beta.APP clivé par gamma-secrétase, sans pratiquement de réactivité hétérospécifique avec .beta.APP non clivé ou d'autres types de fragment de .beta.APP clivé par gamma-secrétase, cependant qu'un second adduit fluorescent se lie à une partie au sein de la région terminale amino du fragment de .beta.APP clivé par gamma-secrétase. La surveillance du transfert d'énergie fluorescente entre les adduits permet de détecter la liaison avec le fragment de .beta.APP clivé par gamma-secrétase.
Hendrick Joseph P.
Lewis Martin
Pak Roger
Roberts Susan B.
Smith David W.
Bristol-Myers Squibb Company
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1626631