Gene expression in plastids based on replicating vectors

Details Gene expression in plastids based on replicating vectors Gene expression in plastids based on replicating vectors

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01)

Patent

CA 2453023

A process of generating transgenic plants or plant cells transformed on their plastome and being devoid of a selection marker, comprising the following steps: (a) transforming plastids of a plant or plant cell with a DNA comprising: (i) a nucleotide sequence conferring replication of said DNA in a plant cell, (ii) at least one sequence of interest, (iii) sequences flanking said at least one sequence of interest necessary for stable integration of said at least one sequence of interest into the plastid genome, and (iv) a selection marker outside of said sequences flanking said sequence(s) of interest; (b) allowing integration of said at least one sequence of interest into the plastome in the presence of selective pressure; (c) allowing loss of said selection marker sequence by releasing selective pressure; and (d) recovering cells and/or plants being genetically transformed on their plastomes and being devoid of said selection marker.

L'invention concerne un procédé permettant de générer des plantes transgéniques ou des cellules de plantes transformées en leurs plastomes et dépourvues d'un marqueur de sélection, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : (a) transformation des plastides d'une plante ou d'une cellule de plante par un ADN comprenant (i) une séquence nucléotide conférant une réplication dudit ADN dans une cellule de plante, (ii) au moins une séquence appropriée, (iii) des séquences situées au flanc de la séquence appropriée précitée, nécessaire pour l'intégration stable de cette séquence dans le génome plastide, et (iv) un marqueur de sélection à l'extérieur desdites séquences situées au flanc desdites séquences appropriées ; (b) intégration de ladite séquence appropriée dans le plastome en présence d'une pression sélective ; (c) perte de ladite séquence du marqueur de sélection par relâchement de la pression sélective ; et (d) récupération des cellules et/ou des plantes génétiquement transformées sur leurs plastomes et dépourvues dudit marqueur de sélection.

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