C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2522753
A highly sensitive, high-throughput immuno-amplification assay is provided for clinically relevant samples, such as blood. The assay comprises the use of two proximity members comprising an analyte-specific binding component conjugated to an oligonucleotide. Binding an analyte brings the oligonucleotide moieties of the proximity members sufficiently close to form an amplicon. The presence of the analyte then is detected through amplification of the amplicon and detection of the amplified nucleic acids. The sensitivity of the assay of the present invention is improved by preventing spurious or non-specific amplicon formation by proximity members that are not complexed with an analyte. In one embodiment, target-independent amplicon formation is prevented by using hybridization blocker oligonucleotides that bind oligonucleotide moieties that are not hybridized to each other. Background is further reduced by providing a solid phase capture oligonucleotide that prevents amplicon formation until the captured complex is released.
La présente invention a trait à un dosage d'amplification immunologique hautement sensible et à grand rendement pour des échantillons de pertinence clinique, tel que du sang. Le dosage comprend l'utilisation de deux éléments de proximité comportant un constituant de liaison spécifique à un analyte conjugué à un oligonucléotide. La liaison d'un analyte rapproche suffisamment les groupes fonctionnels de l'oligonucléotide des éléments de proximité pour la formation d'un amplicon. La présence de l'analyte est ensuite détectée par amplification de l'amplicon et la détection d'acides nucléiques amplifiés. La sensibilité du dosage de la présente invention est améliorée par la prévention de formation d'amplicons parasites ou non spécifiques par les éléments de proximité qui ne sont pas complexés avec un analyte. Dans un mode de réalisation, la formation d'amplicons indépendants de la cible est empêchée par l'utilisation d'oligonucléotides de blocage d'hybridation qui lient les groupes fonctionnels des oligonucléotides qui ne s'hybrident pas les uns aux autres. Le signal de fond est davantage réduit par la mise à disposition d'un oligonucléotide de capture en phase solide qui empêche la formation d'amplicons jusqu'à la libération du complexe capturé.
Berger Dolores
Hellyer Tobin
Kuhn Andrew
Nadeau James
Nussbaumer William
Becton Dickinson And Company
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1780463