C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2427305
The invention overcomes the deficiencies of the prior art by providing a rapid approach for isolating binding proteins capable of binding small molecules and peptides via "display-less" library screening. In the technique, libraries of candidate binding proteins, such as antibody sequences, are expressed in soluble form in the periplasmic space of gram negative bacteria, such as Escherichia coli, and are mixed with a labeled ligand. In clones expressing recombinant polypeptides with affinity for the ligand, the concentration of the labeled ligand bound to the binding protein is increased and allows the cells to be isolated from the rest of the library. Where fluorescent labeling of the target ligand is used, cells may be isolated by fluorescence activated cell sorting (FACS). The approach is more rapid than prior art methods and avoids problems associated with the surface-expression of ligand fusion proteins employed with phage display.
L'invention porte sur une rapide approche de l'isolation des protéines de liaison capables de se lier à de petites molécules et à des peptides par un criblage de banque <= sans méthode d'expression >=. Selon la technique, les banques de protéines de liaison, telles que des séquences d'anticorps, sont exprimées sous forme soluble dans l'espace périplasmique des bactéries gram négatif telles que Escherichia coli, et sont mélangées à un ligand marqué. Dans des clones exprimant des polypeptides de recombinaison ayant une affinité pour le ligand, la concentration du ligand marqué, lié à la protéine de liaison, est accrue et permet aux cellules d'être isolées du reste de la banque. Lorsque le marquage fluorescent du ligand cible est utilisé, des cellules peuvent être isolées par un tri cellulaire activé par la fluorescence. Cette approche est plus rapide que celles des procédés de la technique antérieure et évite l'apparition de problèmes liés à l'expression à la surface de protéines de fusion du ligand utilisées avec la méthode d'expression à la surface des phages.
Chen Gang
Georgiou George
Hayhurst Andrew
Iverson Brent L.
Thomas Jeffrey G.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Board Of Regents The University Of Texas System
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1741710