Means and methods for nucleic acid transfer

Details Means and methods for nucleic acid transfer Means and methods for nucleic acid transfer

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01)

Patent

CA 2371069

Cells capable of at least, in part, complementing adenovirus E2A function of an adenovirus defective in E2A function. Such cells include a nucleic acid encoding adenovirus E2A or a functional part, derivative and/or analogue thereof, integrated into the genome of the cell. Preferably, the cell has E2A nucleic acid derived from a temperature sensitive adenovirus such as adenovirus ts125. Methods for producing an adenovirus particle containing an adenovirus vector with a functional deletion of E2A. Such a method involves providing a cell as previously described with the functionally deleted adenovirus vector, culturing the cell, and harvesting the virus particle. The functional deletion can comprise a deletion of at least part of the nucleic acid encoding E2A. In such a method, the nucleic acid encoding adenovirus E2A in the genome of the cell preferably has no sequence overlap with the vector which leads to replication competent adenovirus and/or to the formation of an adenovirus vector comprising E2A function. In the method, the adenovirus vector preferably further comprises a functional deletion of E1-region encoding nucleic acid. Adenovirus vectors comprising a functional deletion of adenovirus E2A, preferably a deletion of at least part of the nucleic acid encoding E2A. Preparations of adenovirus vector containing adenovirus particles wherein the adenovirus vector comprises a functional deletion of E2A. Such an adenovirus vector preferably further includes a deletion of nucleic acid encoding E1-region proteins, and may be free of adenovirus vectors comprising E2A function. Methods for providing cells of an individual with a nucleic acid of interest, without risk of administering simultaneously a replication competent adenovirus vector, comprising administering the individual one of the previously described preparations.

Cette invention concerne des cellules capables de compenser au moins partiellement la fonction E2A d'un adénovirus chez lequel cette fonction fait défaut. Ces cellules comprennent un acide nucléique qui code l'E2A d'un adénovirus, ou une partie fonctionnelle, un dérivé et/ou un analogue de celle-ci, et qui est intégré dans le génome de la cellule. De préférence, la cellule possède un acide nucléique d'E2A qui est dérivé d'un adénovirus sensible à la température tel qu'un adénovirus ts125. Cette invention concerne également des procédés de production d'une particule d'adénovirus contenant un vecteur d'adénovirus qui présente un effacement fonction de l'E2A. Ces procédés consistent à préparer une cellule, comme décrit précédemment, dans laquelle le vecteur d'adénovirus a été effacé de manière fonctionnelle, à cultiver cette cellule et à récolter les particules de virus. L'effacement fonctionnel peut comprendre un effacement d'une partie au moins de l'acide nucléique codant l'E2A. D'après ce procédé, l'acide nucléique codant l'E2A d'adénovirus dans le génome de la cellule ne présente de préférence pas de chevauchement de séquence avec le vecteur, ce qui entraîne une réplication de l'adénovirus compétent et/ou la formation d'un vecteur d'adénovirus possédant la fonction E2A. dans ce procédé, le vecteur d'adénovirus présente également et de préférence un effacement fonctionnel de l'acide nucléique codant la région E1. Cette invention concerne également des vecteurs d'adénovirus présentant un effacement fonctionnel de l'E2A d'adénovirus, de préférence un effacement d'une partie au moins de l'acide nucléique codant l'E2A. Cette invention concerne aussi des préparations à base de vecteur d'adénovirus contenant des particules d'adénovirus, le vecteur d'adénovirus présentant un effacement fonctionnel de l'E2A. Ce vecteur d'adénovirus présente de préférence un effacement de l'acide nucléique codant les protéines de la région E1, et peut être exempt de vecteurs d'adénovirus comprenant une fonction E2A. Cette invention concerne enfin des procédés permettant de fournir aux cellules d'un individu un acide nucléique présentant un intérêt et ceci sans courir le risque d'une administration simultanée d'un vecteur d'adénovirus compétent et de réplication, lesquels procédés consistent à administrer à un individu l'une des préparations susmentionnées.

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