C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/24 (2006.01) C12N 15/56 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01) C12S 3/08 (2006.01) D21C 9/10 (2006.01)
Patent
CA 2563469
The invention is related to a method and DNA constructs for obtaining in a filamentous fungus host a higher production level of a carbohydrate degrading (CD) enzyme, having in its original state a catalytic module (CAT) and a carbohydrate binding module (CBM) separated by a linker region. The DNA construct comprising a truncated actinomycetes, preferably Nonomuraea flexuosa (Nf) derived DNA sequence encoding a truncated form of the CD enzyme, for example Nf Xyn1 1A, Nf Xyn10A, and is introduced into a filamentous fungal host. Said CD enzyme contains the catalytically active region of CAT but lacks part or all of the CBM, or all of the CBM and part or all of the linker region and is expressed and secreted under the control of regulatory sequences comprising at least a signal sequence, but also promoters, terminators and DNA sequences encoding a secretable carrier protein or domains thereof, preferably originating from filamentous fungi are included. The production level obtained with DNA sequence having the shortened DNA sequence encoding the truncated form of the CD enzyme is higher than the production level obtained with DNA construct encoding the corresponding full length CD enzyme.
La présente invention se rapporte à un procédé et à des constructions d'ADN permettant d'obtenir dans un hôte du type champignon filamenteux un niveau de production supérieur d'enzymes dégradant les glucides (CD), ayant dans son état d'origine un module catalytique (CAT) et un module de liaison aux glucides (CBM) séparés par une région lieuse. La construction d'ADN comporte une séquence tronquée dérivée d'ADN d'actinomycètes, de préférence <i>Nonomuraea flexuosa (Nf)</i>, codant une forme tronquée de l'enzyme CD, par exemple NfXyn11A, NfXyn10A, et est introduite dans un hôte du type champignon filamenteux. Ledit enzyme CD contient la région catalytiquement active du CAT mais est partiellement ou totalement dépourvu du CBM, et partiellement ou totalement dépourvu de la région lieuse, et est exprimé et sécrété sous le contrôle des séquences régulatrices comportant au moins une séquence de signaux, mais également des promoteurs, des codons de terminaison et des séquences d'ADN codant une protéine support pouvant être sécrétée ou des domaines d'une telle protéine, de préférence provenant de champignons filamenteux. Le niveau de production obtenu avec la séquence d'ADN ayant la séquence d'ADN raccourcie codant la forme tronquée de l'enzyme CD est supérieur au niveau de production obtenu avec la construction d'ADN codant l'enzyme CD pleine longueur correspondant.
Fagerstrom Richard
Kallio Jarno
Lantto Raija
Leskinen Sanna
Mantyla Arja
Ab Enzymes Oy
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1965529