A - Human Necessities – 01 – N
Patent
A - Human Necessities
01
N
A01N 1/00 (2006.01) A01N 1/02 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) C12N 5/08 (2006.01)
Patent
CA 2539274
Methods and compositions are provided for the introduction and washout of vitrifiable concentrations of cryoprotectant in organs and tissues. The methods comprise cooling the organ to below -10~C by perfusion with a solution having a freezing point below -10~C, a temperature from -10 to -40~C, and a tonicity from 1.1 to 2.0 times isotonic, after previous perfusion with said solution for a time insufficient for approximate osmotic equilibration of the organ with the solution. The methods further comprise increasing the concentration of cryoprotectant further at a temperature from -10 to -40~C to prepare the organ or tissue for vitrification. The methods further comprise cooling and vitrifying the organ, rewarming it, and perfusing the organ with a vitrifiable concentration of cryoprotectant that is the same as or less than the concentration used for vitrification, without the addition of an osmotic buffering agent. Rewarming is accomplished either by rapid (>1 ~C/min, and preferably -.2-20~C/min) elevation of arterial perfusate temperature from below -20~C to above -15~C during continuous perfusion of the organ or by perfusing the organ with pre-warmed arterial perfusate at >--15~C. Extraordinarily effective multicomponent compositions are also provided for the process, particularly involving a vitrification solution whose warming rate after vitrification can be <1~C/min without freezing during rewarming and a chilling injury protective solution having zero toxicity to whole organs at 0~C and permitting almost complete avoidance of chilling injury at -20 to - 25~C.
La présente invention a trait à des procédés et des compositions pour l'introduction et l'élimination de concentrations vitrifiables de cryoprotecteurs dans des organes et des tissus. Les procédés comprennent le refroidissement de l'organe à une température inférieure à -10 ·C par perfusion avec une solution ayant un point de congélation inférieur à -10 ·C ; une température entre -10 ·C et -40 ·C, et une tonicité entre 1,1 et 2,0 fois isotonique, suite à une précédente perfusion avec ladite solution pour une durée insuffisante à l'équilibre osmotique approximatif de l'organe dans la solution. Les procédés comprennent également l'accroissement supplémentaire de la concentration de cryoprotecteur à une température comprise entre -10 et -40· C pour la préparation de l'organe ou du tissu à la vitrification. Les procédés comprennent en outre le refroidissement et la vitrification de l'organe, son réchauffage, et la perfusion de l'organe avec une concentration vitrifiable de cryoprotecteur égale ou inférieure à la concentration utilisée pour la vitrification, sans addition d'un agent tampon osmotique. Le réchauffage est réalisé soit par élévation rapide de la température de perfusat artériel (> 1 ·C/minute, de préférence .sim.2 à 20 ·C/minute) d'une température inférieure à 20 ·C à une température supérieure à -15 ·C lors d'une perfusion continue de l'organe ou par la perfusion de l'organe avec un perfusat artériel à >= -15 ·C. Des compositions à constituants multiples d'efficacité extraordinaire sont également prévues pour le procédé, notamment comprenant une solution de vitrification dont le taux de réchauffage après vitrification peut être de <1 ·C/minute sans congélation lors du réchauffage et une solution de protection contre l'altération par réfrigération présentant une toxicité nulle à des organes entiers à 0 ·C et permettant d'empêcher presque complètement l'altération par réfrigération à une température comprise entre -20 et -25 ·C.
Fahy Gregory M.
Wowk Brian
21st Century Medicine Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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