Methods for isolating nucleic acids using alkaline protease

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

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Details

C12N 15/10 (2006.01) C07H 1/06 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2260940

The present invention discloses a novel method for treating nucleic acid solutions with alkaline protease substantially to inactivate proteins in the solution, particularly proteins capable of degrading nucleic acid material of interest in the solution. The present invention also discloses a novel method for isolating a nucleic acid material, such as RNA or DNA, from a biological sample by incubating an alkaline lysate of the sample with alkaline protease. In a preferred aspect of the method of isolation of this invention, a resin matrix of silica particle is used to isolate a nucleic acid material from a nucleic acid solution treated with alkaline protease. Application of the disclosed methods to a biological sample or to a nucleic acid solution results in nucleic acid material which is sufficiently free of contamination with active proteins to be useful for a variety of different practical applications.

La présente invention concerne un nouveau procédé de traitement de solutions d'acides nucléiques à l'aide d'une protéase alcaline, essentiellement pour inactiver des protéines de la solution, notamment des protéines pouvant altérer les acides nucléiques d'intérêt de la solution. La présente invention concerne également un nouveau procédé d'isolement d'acides nucléiques, tels que l'ARN ou l'ADN, à partir d'un échantillon biologique, consistant à incuber un lysat alcalin de l'échantillon avec une protéase alcaline. Dans un mode préféré de réalisation du procédé d'isolement de l'invention, on utilise une matrice résineuse de particule de silice pour isoler des acides nucléiques à partir d'une solution d'acides nucléiques traitée avec la protéase alcaline. L'application des procédés de l'invention à un échantillon biologique ou à une solution d'acides nucléiques permet d'obtenir des acides nucléiques qui sont suffisamment dépourvus de contamination par des protéines actives, et que l'on peut utiliser dans une diversité d'applications pratiques et différentes.

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