Methods for making nucleic acids

Details Methods for making nucleic acids Methods for making nucleic acids

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2406691

Nucleic acids are made by converting a primed single-stranded DNA to a double- stranded DNA by a method comprising the step contacting the single-stranded DNA with a DNA polymerase having 5' exonuclease activity under conditions whereby the DNA polymerase converts the single-stranded DNA to the double- stranded DNA, wherein the single-stranded DNA is primed with oligonucleotide primer comprising a sequence complementary to the 3' end of the single- stranded DNA, and at least one of the 5' end of the primer and the single- stranded DNA comprises an RNA polymerase promoter joined to an upstream (5') flanking moiety which protects the promoter from the 5' exonuclease activity of the DNA polymerase.

Cette invention permet de produire des acides nucléiques par conversion d'un ADN simple brin amorcé en un ADN double brin au moyen d'un procédé consistant à mettre en contact l'ADN simple brin avec une ADN polymérase présentant une activité exonucléase dans l'extrémité 5', dans des conditions entraînant la conversion par l'ADN polymérase de l'ADN simple brin en un ADN double brin. Dans ce procédé, l'ADN simple brin est amorcé avec un oligonucléotide d'amorce comprenant une séquence complémentaire à l'extrémité 3' de cet ADN simple brin, et l'extrémité 5' de l'amorce et/ou l'ADN simple brin comprennent un promoteur d'ARN polymérase associé à une fraction adjacente située en amont (5'), qui protège le promoteur de l'activité exonucléase 5' de l'ADN polymérase.

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