C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/22 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/16 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2229075
The present invention provides new methods, employing a nucleotide integrase, for cleaving double-stranded and single stranded DNA substrates at specific sites and for attaching nucleic acid molecules to the cleaved DNA substrates. One method uses a nucleotide integrase to cleave one strand of a double-stranded DNA and to concomitantly attach a nucleic acid molecule to the cleaved strand. Another method uses a nucleotide integrase to cleave both strands of a double-stranded DNA substrate and to attach a nucleic acid molecule to one strand of the DNA substrate. Another method uses a nucleotide integrase to cleave both strands of a double-stranded DNA substrate and to attach an RNA molecule to one strand of the substrate and for attaching a cDNA to the other strand of the substrate. Another method cleaves single stranded DNA with the concomitant insertion of a nucleic acid molecule at the cleavage point. The nucleotide integrase comprises an RNP particle which comprises a group II intron RNA bound to a group II intron encoded protein. The present invention also relates to purified and reconstituted RNP particles and reconstituted RNP that cleave DNA substrates.
La présente invention se rapporte à de nouveaux procédés de clivage, à l'aide d'une intégrase nucléotidique, de substrats d'ADN bicaténaires et monocaténaires sur des sites spécifiques, et à un procédé de fixation de molécules d'acide nucléique sur les substrats d'ADN clivés. Selon un procédé, une intégrase nucléotidique est utilisée pour cliver un brin d'un ADN bicaténaire et pour fixer simultanément une molécule d'acide nucléique au brin clivé. Selon un autre procédé, une intégrase nucléotidique est utilisée pour cliver les deux brins d'un substrat d'ADN bicaténaire et pour fixer une molécule d'acide nucléique à un brin du substrat d'ADN. Selon encore un autre procédé, une intégrase nucléotidique est utilisée pour cliver les deux brins d'un substrat d'ADN bicaténaire et pour fixer une molécule d'ARN à un brin du substrat, et également pour fixer un ADNc à l'autre brin du substrat. Un autre procédé assure le clivage d'un ADN monocaténaire par l'insertion concomitante d'une molécule d'acide nucléique au point de clivage. L'intégrase nucléotidique comprend une particule RNP comportant un ARN de l'intron du groupe II lié à une protéine codée par l'intron du groupe II. La présente invention se rapporte également à des particules RNP purifiées et reconstituées et à une particule RNP reconstituée qui clivent les substrats d'ADN.
Guo Huatao
Lambowitz Alan M.
Yang Jian
Zimmerly Steven
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
The Ohio State Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1846125