C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/06 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) C12N 7/02 (2006.01)
Patent
CA 2288679
The object of the invention is a process for the production of virus in cell culture with high yield and low levels of contamination by cell proteins, the virus being appropriate to be used in the preparation of seed lots and vaccines. As used herein, the term "virus" means inactivated virus, attenuated virus and recombinant virus, including chimeric virus. The process comprises the steps of: (a) preparing a culture of cells which are permissive to the virus and acceptable as a substrate for vaccine production; (b) suspending the cells in a suitable medium followed by cell seeding at low densities; (c) incubating the cell culture at 30 to 40 ~C for an appropriate period of time; (d) removing the medium from the cell culture of step (c) and inoculating with seed virus; (e) incubating the cell culture of step (d) at 25 to 40 ~C for an appropriate period of time; (f) removing the medium followed by washing the cells once or more times and replacing the medium; (g) incubating the cell culture of step (f) at 25 to 40 ~C for an appropriate period of time; (h) total or partial harvesting of culture supernatant containing virus with or without addition of stabilizer; (i) optionally, carrying out multiple harvests of virus containing medium, at any desired interval, by replacing the removed medium and re-incubating the culture for an appropriate period; (j) optionally, removing the cell debris and whole cells from the harvested virus; (l) optionally, virus inactivation and; (m) storing the virus at -45 ~C or lower.
L'invention concerne un procédé de production de virus dans une culture cellulaire, présentant non seulement un rendement élevé mais également de faibles niveaux de contamination par des protéines cellulaires, le virus étant adapté à une utilisation dans la préparation de lots de souches et de vaccins. On entend par le terme "virus" un virus inactivé, un virus atténué et un virus recombiné, virus chimère y compris. Le procédé de l'invention consiste: (a) à préparer une culture de cellules qui sont permissives au virus et acceptables comme substrat pour la production de vaccins; (b) à mettre les cellules en suspension dans un milieu approprié puis à les ensemencer à des densités faibles; (c) à laisser incuber la culture cellulaire à 30-40 ·C pour une durée appropriée; (d) à retirer le milieu de la culture cellulaire du (c) et à inoculer une souche virale; (e) à laisser incuber la culture cellulaire du (d) à 25-40 ·C pour une durée appropriée; (f) à retirer le milieu puis à laver les cellules une ou plusieurs fois avant de les replacer dans le milieu; (g) à laisser incuber la culture cellulaire de (f) à 25-40 ·C pour une durée appropriée; (h) à récolter totalement ou partiellement le surnageant de la culture renfermant le virus avec ou sans addition d'un stabilisant; (i) et éventuellement à procéder à plusieurs récoltes du milieu renfermant le virus, quel que soit l'intervalle de temps, en remplaçant le milieu retiré et en laissant incuber de nouveau la culture pour une durée appropriée; (j) et éventuellement, à retirer les débris de cellules et les cellules entières du virus récolté; (l) et éventuellement, à inactiver le virus; et (m) à stocker ledit virus à -45 ·C ou à une température inférieure.
Da Silva Freire Marcos
Galler Ricardo
Mann George Fobes
Yamamura Anna Maya Yoshida
Fiocruz Fundacao Oswaldo Cruz
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1681944