C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/34 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01)
Patent
CA 2577122
The present invention is directed to novel methods of synthesizing multiple copies of a target nucleic acid sequence which are autocatalytic (i.e., able to cycle automatically without the need to modify reaction conditions such as temperature, pH, or ionic strength and using the product of one cycle in the next one). In particular, the present invention discloses a method of nucleic acid amplification which is robust and efficient, while reducing the appearance of side-products. The method uses only one primer, the "priming oligonucleotide," a 3'blocked promoter oligonucleotide and optionally, a means for terminating a primer extension reaction, to amplify RNA or DNA molecules in vitro, while reducing or eliminating the formation of side-products. The method of the present invention minimizes or eliminates the emergence of side- products, thus providing a high level of specificity. Furthermore, the appearance of side-products can complicate the analysis of the amplification reaction by various molecular detection techniques. The present invention minimizes or eliminates this problem, thus providing an enhanced level of sensitivity.
La présente invention concerne une nouvelle technique de synthèse de copies multiples de séquences d'acide nucléique cible qui sont autocatalytiques, c'est à dire capables d'effectuer un cycle automatiquement sans modifier des conditions de réaction telles que la température, le pH ou la force ionique en utilisant le produit d'un cycle dans le cycle suivant). Cette invention concerne, en particulier, une technique d'amplification d'acide nucléique qui est robuste et efficace, tout en réduisant l'apparition de sous-produits. Cette technique n'utilise qu'une seule amorce, <= l'oligonucléotide d'amorçage >=, un oligonucléotide promoteur bloqué en3' et éventuellement, un organe permettant de terminer une réaction d'extension d'amorce, afin d'amplifier des molécules d'ARN ou d'ADN in vitro, tout en réduisant ou en éliminant la formation de sous-produits. La technique de cette invention, minimise ou élimine l'émergence de sous-produits, offrant ainsi un niveau élevé de spécificité. Par ailleurs, l'apparition de sous-produits peut compliquer l'analyse de la réaction d'amplification via diverses techniques de détection moléculaire. La présente invention minimise ou élimine ce problème, offrant ainsi un haut niveau de sensibilité.
Becker Michael M.
Brentano Steven T.
Kolk Daniel P.
Lam Wai-Chung
Livezey Kristin W.
Gen-Probe Incorporated
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1596095