C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/13 (2006.01) C07D 209/48 (2006.01) C07D 239/02 (2006.01) C07D 333/28 (2006.01) C07D 473/16 (2006.01) C07D 473/18 (2006.01) C07D 519/00 (2006.01) C07H 19/06 (2006.01) C07H 19/16 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2501063
The present invention relates to methods of transferring a label from novel substrates to O6-alkylguanine-DNA alkyltransferases (AGT) and O6-alkylguanine- DNA alkyltransferase fusion proteins, and to novel substrates suitable in such methods. Proteins of interest are incorporated into an AGT fusion protein, the AGT fusion protein is contacted with particular AGT substrates carrying a label, and the AGT fusion protein is detected and optionally further manipulated using the label in a system designed for recognising and/or handling the label. The particular AGT substrates used in the method of the invention are O6-substituted guanine derivatives or related nitrogen containing hydroxy-heterocycles and their sulfur analogs wherein the O6- substituent is an activated methyl derivative suitable for transfer from guanine or the corresponding heterocycle to AGT, and further carrying a label or a plurality of same or different labels. The invention relates also to the novel AGT substrates as such, to methods of manufacture of such novel substrates, and to intermediates useful in the synthesis of such novel AGT substrates.
L'invention concerne des procédés de transfert d'une étiquette à partir de substrats sur des protéines de fusion O?6¿-alkylguanine-ADN alkyltransférases (AGT) et O?6¿-alkylguanine-ADN alkyltransférase, et des substrats convenant à de tels procédés. Les protéines d'intérêt sont incorporées dans une protéine de fusion AGT, la protéine de fusion AGT est mise en contact avec des substrats particuliers d'AGT portant une étiquette, puis la protéine de fusion AGT est détectée et, éventuellement encore manipulée, au moyen de l'étiquette dans un système conçu pour reconnaître et/ou manipuler l'étiquette. Les substrats particuliers d'AGT utilisés dans le procédé de l'invention sont des dérivés guanines O?6¿-substitués ou des hydroxy-hétérocycles associés contenant de l'azote, et leurs analogues sulfurés, dans lesquels le substituant en O?6¿ est un dérivé méthyle activé adapté au transfert de guanine, ou de l'hétérocycle correspondant, sur l'AGT, et portant, en outre, une étiquette ou plusieurs des mêmes étiquettes ou plusieurs étiquettes différentes. L'invention concerne aussi les substrats d'AGT en tant que tels, des procédés de fabrication de ces substrats, et des intermédiaires utiles dans la synthèse des substrats d'AGT.
Bieri Christoph
Johnsson Kai
Kindermann Maik
Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (epfl)
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1930431