Vectors having enhanced expression, and methods of making...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/863 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 15/39 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2283537

Disclosed and claimed are vectors having enhanced expression and methods for making and using them. Enhancement of expression is from substantially co-temporal expression of at least one first nucleic acid molecule and at least one second nucleic acid molecule. The second nucleic acid molecule encodes a transcription factor or a translation factor or a transcription factor and a translation factor. The contemporaneous expression can be from operably linking the first and second nucleic molecules to a single promoter, or from operably linking the first nucleic acid molecule to a first promoter and the second nucleic molecule to a second promoter wherein the first and second promoters function substantially contemporaneously. Thus, the first and second nucleic acid molecules can be at the same locus in the vector, or at different loci. The second nucleic acid molecule can encode: one transcription factor or more than one transcription factor; or one translation factor or more than one translation factor; or at least one transcription factor and at least one translation factor. The transcription factor can be from vaccinia H4L, D6, A7, G8R, A1L, A2L, H5R, or combinations thereof. The translation factor can be from a K3L open reading frame, an E3L open reading frame, a VAI RNA, an EBER RNA, a sigma 3 open reading frame, a TRBP open reading frame, or combinations thereof. The vector can be a poxvirus such as an attenuated poxvirus, e.g., NYVAC, or ALVAC.

On décrit des vecteurs ayant une expression facilitée, ainsi que des méthodes de production et d'utilisation desdits vecteurs. La facilitation d'expression découle d'une expression sensiblement contemporaine d'au moins une première molécule d'acide nucléique et d'au moins une deuxième molécule d'acide nucléique. La deuxième molécule d'acide nucléique code un facteur de transcription et/ou un facteur de traduction. L'expression contemporaine peut découler d'une liaison fonctionnelle de la première molécule et de la deuxième molécule d'acide nucléique avec un seul promoteur, ou d'une liaison fonctionnelle de la première molécule d'acide nucléique avec un premier promoteur, et de la deuxième molécule d'acide nucléique avec un deuxième promoteur, le premier promoteur et le deuxième promoteur fonctionnant de manière sensiblement contemporaine. Ainsi, la première molécule et la deuxième molécule d'acide nucléique peuvent se trouver sur le même site actif dans le vecteur, ou sur des sites différents. La deuxième molécule d'acide nucléique peut coder un ou plusieurs facteurs de transcription, un ou plusieurs facteurs de traduction, ou au moins un facteur de transcription et au moins un facteur de traduction. Le facteur de transcription peut être issu de la vaccine H4L, D6, A7, G8R, A1L, A2L, H5R, ou une combinaison de ces éléments. Le facteur de traduction peut être issu d'un cadre ouvert de lecture K3L, d'un cadre ouvert de lecture E3L, d'un ARN VAI, d'un ARN EBER, d'un cadre ouvert de lecture d'un facteur sigma 3, d'un cadre ouvert de lecture TRBP, ou d'une combinaison de ces éléments. Le vecteur peut être un poxvirus tel que qu'un poxvirus atténué (NYVAC ou ALVAC, par exemple).

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